質粒DNA分離方法比較

發(fā)酵後(hòu)的E.Coli培養液

用低速大容量冷凍(dòng)離心機(jī)，大容量甩平或角式轉頭（3000~6000rpm,30~15min）或高速連續流轉頭（10000～18000rpm，流量300～600ml/min）

E.Coli菌體沉澱

用溶菌酶破細胞壁

用表面活性劑(jì)破細(xì)胞膜（如Triton X-100，SDS等）

大部分染色體DNA粘附在膜蛋白上，用一定濃度的鹽溶液（如1 mol NaCl 或1 mol 醋酸鈉）溶解後台式高速離心機（Eppendorf管10000rpm，10min）或高速冷凍(dòng)離心機10000～12000rpm×10min，上清中大部分爲染色體DNA，沉澱(diàn)中含質粒DNA，降解的質粒DNA，RNA及蛋白質

在沉澱(diàn)中加入異(yì)丙醇得到粗制的質粒DNA

沉澱(diàn)中加入TE緩沖(chōng)液（pH8.0）

粗制DNA在-20℃在重力狀态喜愛(ài)沉澱(diàn)15min以上，高速離心機12000rpm（近15000g）4℃離心5min去上清

用苯酚抽提去蛋白質(zhì)或用分子篩(shāi)去蛋白質(zhì)

用RNA酶降解RNA

真空中抽去異丙醇，溶液中加入TE緩(huǎn)沖(chōng)液

過(guò)柱（聚丙烯酰胺）RNA留柱，質(zhì)粒DNA過(guò)柱

加入E.B及Triton X-100,在CsCl中（預制梯度或平衡等密度離(lí)心，自形成梯度）用角轉頭，近垂直轉頭做超速離(lí)心（見(jiàn)文獻10）

較(jiào)純(chún)的質粒DNA，但含有5～10%的染色體DNA和降解的DNA片段

剩餘的蛋白質上浮，RNA沉澱
，染色體DNA在離心管中上部形成區帶(dài)，質粒DNA在離心管中下部形成純(chún)樣品區帶(dài)

密度梯度儀或其他簡易方法從(cóng)離心管中抽出，經過帶(dài)流動池的分光光度計後分部收集，從(cóng)吸光度峰可以判斷質粒DNA所在的位置

去CsCl，去其他組分得到高純(chún)度質(zhì)粒DNA