流感疫苗生産的純化過程:
1. 已培養好的帶(dài)病毒的雞(jī)胚用75%酒精消毒;
2. 收集雞(jī)胚尿囊液:根據(jù)雞(jī)蛋大小收集量略有不同(每隻6-10ml);
3. 尿囊液初濾(lǜ)JST型10μm濾(lǜ)芯過(guò)濾(lǜ);
4. 連續流離心機(jī)或超濾系統過(guò)濾
a. 連續流離心機(jī):用12,000rpm,流量:每分鍾600-800ml,除去雜質,上清液用於(yú)透析濃縮;
b. Millipore超濾(lǜ)系統(tǒng),0.45μm濾(lǜ)膜,除去雜質
5. 尿囊液的透析濃縮:用Millipore超濾(lǜ)器,1000KD膜包濃縮,濃縮後(hòu)通常爲尿囊液量的1/30;
6. 超速離(lí)心的病毒純(chún)化(略);
7. 福爾(ěr)馬(mǎ)林脫毒;
8. 乙醚裂解;
9. 100KD透析脫(tuō)糖;
10. 去福爾(ěr)馬(mǎ)林;
11. 去乙醚……
12. 幾(jǐ)種流行病毒抗原的混合(如H1N1+H3N2+H2N2)和稀釋(shì)
13. 加入穩(wěn)定劑(jì)
14. 成品
離心純化需要準備的儀器和基本材料:
1. 儀(yí)器
a. 阿貝(bèi)折射儀 Abbe refractometer (測(cè)蔗糖濃度)
b. Cole parmer 軟(ruǎn)管泵:KH-77913-25
c. 紫外分光光度計或核酸蛋白分析儀(有280nm,260nm波長(zhǎng)的),可以是帶(dài)流動池及記 錄儀,也可以是帶(dài)标準樣品池的)
2. 梯度液
a. PB緩(huǎn)沖(chōng)液PH7.3
b. 30% w/w蔗糖液(Sucrose,Sigma,AR級(jí))
c. 55% w/w蔗糖液
d. 58% w/w蔗糖液
3. 實(shí)驗(yàn)器具
a. 50ml有刻度玻璃管 100支
b. 500ml有刻度燒(shāo)杯 5支
c. 100ml有刻度燒(shāo)杯 5支
d. 1000ml有刻度量筒 3隻(zhǐ)
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