談分離膠對(duì)血清中HBV DNA測(cè)定結果的影響

當前分析
分離膠促凝劑真空負壓採血管不僅填充有進口分離膠，而且在採血管内壁上均勻塗布有促凝劑，因此可大大縮短血液凝固時間。進口分離膠對血清中的蛋白的吸附能力低，穩定性強，離心後的分離膠固化形成屏障，平整地将血清與血細胞*分離，能夠有效阻止血清和血細胞間的物質交換，從而有利於獲得高質量的血清，使血液檢測的結果更加真實，也有利於提高血清的收集率。目前分離膠促凝劑真空負壓採血管主要用於以血清标本爲檢測對象的臨床生化檢驗、免疫學檢驗等。但對分離膠促凝劑真空負壓採血管與普通第二代促凝劑採血管所採集全血标本，並在分離血清後以血清作爲檢測對象進行 乙 型 肝 炎 病 毒DNA 熒光定量聚合酶鏈反應測定結果差異的相關研究較少。爲瞭探讨分離膠對血清中HBV DNA測定結果的影響，筆者進行瞭相關對比試驗和分析，結果報道如下。

資料與方法
随機選取90例本院住院和門診乙型肝炎乙肝患者其中男52例女38例平均年齡(45歲)每例患者採用2種採血管進行全血标本採集，患者在接受1次靜脈穿刺後分别用2種採血管採集全血标本，其中分離膠促凝劑真空負壓採血管爲試驗組，未添加分離膠的普通第二代促凝劑真空負壓採血管爲對照組各採集3mL靜脈血标本。

耗材：
採用統一的不同類型一次性人體靜脈血採集管

方法：
90例患者分别用分離膠促凝劑真空負壓採血管和促凝劑真空負壓採血管，同時各無菌採集空腹靜脈血,3mL分離膠促凝劑真空負壓採血管採血後立即180度輕輕颠倒混勻5-6次室溫放置20分鍾後，8cm爲離心半徑3500r/min離心10min。将以上各組來源的血清标本分别按HVB檢測試劑盒說明書進行HBV DNA定量擴增檢測
。所測結果用拷貝數的對數值表示。（2）HBV DNA提取和擴增： 直接吸取血清:100L，加等量的DNA濃縮液充分混勻，5cm爲離心半徑12000r/min離心10min,棄上清液,加20LDNA提取液充分混勻,100度金屬浴10min前後誤差不超過1min,靜置6-8h以5cm爲離心半徑10000r/min離心5min,取上清液5l做PCR反應。将點好樣的反應管放入PCR儀上，93度2min預變性,然後按10個循環。每批PCR試驗均同時檢測陰陽性對照标本和臨界陽性标本。
統計學處理!採用SPSS13.0統計軟件對試驗數據進行配對統計學處理；採用配對t檢驗進行檢測結果比較,p<0.05時比較差異有統計學意義.

結果

分離膠促凝劑真空負壓採血管與普通第二代促凝劑真空負壓採血管分離血清進行檢測結果見表。讨論

随著(zhe)分子生物學的發展，乙肝患者的血清學檢測已經從以常規的“兩對半"檢測間接反映患者體内病毒是否複制，開始轉向血清學的HBV DNA檢測。乙肝對人類危害性極大，病毒的活躍複制則是啓動或激發肝髒組織炎性反應的因素，因此從HBV DNA定量的角度檢測對臨床診斷和評價病毒複制水平有十分重要的意義。目前臨床上絕大多數都是以分離自用普通第二代促凝劑真空負壓採血管所採集的全血标本的血清進行HBV DNA檢測，所以本研究選擇該種採血管作爲對照組。FQ-PCR技術是在常規PCR基礎上添加瞭(le)熒光标記探針，在無特異性PCR發生時，熒光信号不改變；當有特異性PCR擴增時
，熒光信号增強。在FQ-PCR檢測過程中，實時檢測反應體系中熒光信号的變化，參照陽性梯度标準品，由電腦自動計算出樣品起始DNA定量結果。由於分離膠技術不斷得到推廣，分離膠促凝劑真空負壓採血管在臨床檢驗醫學工作中得到廣泛應用。但分離膠促凝劑真空負壓採血管分離血清後對HBV DNA檢測結果的影響相關報道很少。本研究結果顯示，使用分離膠促凝劑真空負壓採血管的90例乙肝患者血清HBV DNA的檢測結果對數值爲,4.92+-0.19使用普通促凝劑真空負壓採血管時乙肝患者血清HBV DNA的檢測結果對數值爲；經配對檢驗分析比較，兩者間的差異無統計學意義p0.05。因此使用分離膠促凝劑真空負壓採血管不會對HBV DNA檢測産生影響，而分離膠促凝劑真空負壓採血管有利於更快速地分離血清進行HBV DNA檢測，能大大提高工作效率，值得在臨床PCR擴增實驗室中廣泛