用離心機(jī)提取乳酸脫氫酶及輔(fǔ)酶

　　台式離心機可以應用於乳酸脫氫酶及輔酶的提取。乳酸脫氫酶，是一種不需氧脫氫酶，以輔酶I（NAD﹢）爲輔酶
，催化乳酸與丙酮酸的可逆的氧化還原反應。肌肉中含有大量的乳酸脫氫酶
，在乳酸含量較高及氧氣充足情況下，催化乳酸生成丙酮酸，體外實驗中，爲觀察方便，在隔絕空氣後以甲烯藍作爲受氫體
，井用固定反應中生成的丙酮酸，而使乳酸全部轉化爲丙酮酸。今天我們對如何通過台式離心機提取乳酸脫氫酶及輔酶I進行介紹。
　　
　　通過離心提取乳酸脫氫酶及輔酶用到的材料、試劑及設備有：（1）動物後腿肌肉;（2）9g/LNaCl溶液;（3）活性炭;（4）10g/L乳酸锂溶液;（5）5g/LKCN溶液;（6）乳缽;（7）台式離心機等
　　
　　具體操作方法：
　　
　　1．輔酶I（NAD﹢）的制備：取動物後腿肌肉2g置沸水浴中煮沸4—5分鍾（抑制酶的活力，防止将輔酶I破壞），取出冷卻、剪碎，加入少許9g/LNaCl溶液及細沙用乳缽研磨成糊狀，再加9g/LNaCl溶液8ml混勻，利用台式離心機進行離心沉澱，收集上清液，儲冰箱備用。
　　
　　2．乳酸脫氫酶酶蛋白的提取：取動物後腿肌肉2g置乳缽中，加入少許9g/LNaCl溶液及細砂，仔細研磨後再加9g/LNaCl溶液8ml混勻，用雙層紗布過濾，濾液加活性炭0.5g振搖數分鍾後放置半小時，並時常搖動，然後通過台式離心機離心分離，取上清液備用。
　　
　　來源
：高速離心機