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如何使用反向移液技術(shù)更的移取蛋白溶液

更新時間:2011-10-12點擊次數:2338

每支移液器的液程通常都用純水和正向移液技術校準過。因此我們推薦使用正向移液技術移取水性溶液 ,如緩沖(chōng)液,稀釋酸或堿。當移取不同於(yú)水的液體時,由於(yú)具有不同的液體特性,其移液量可能偏離所選的量

1.将按鈕(niǔ)壓至第二停點(diǎn)。

2.将吸頭浸入液面1cm處,緩慢釋放按鈕使其滑回原位。這将時液體充滿吸頭。将吸頭從液體中取出,接觸(chù)容器邊(biān)緣去掉多餘液體。

3.放液到接收容器時平穩地輕按按鈕至*停點。保持在這個位置。一些液體會殘留在吸頭中不能被放出。

4.殘(cán)留在吸頭内的液體能夠(gòu)被吹回原溶劑中或者同吸頭一起丢棄。

5.松開(kāi)按鈕到準備(bèi)位置。

    選擇合适的移液器對於(yú)微量移液的性也很重要,Thermo Scientific F系列移液器的*吹出設計則滿足瞭(le)微量移液對性的需求。低於(yú)50μl液程的Thermo F系列移液器均採用雙活塞設計,與其它普通移液器相比,其空氣吹出能力增大50%-60%,因此在小體積的液體吹出時會非常幹淨*,大大提高瞭(le)移液的性。

    我們使用Thermo Scientific Finnpipette F2 1-10 μl移液器,配合Thermo Scientific Finntip Flex 10吸頭,同時分别使用正向移液和反向移液,移取1%牛血清白蛋白(BSA,Sigma A7030)進(jìn)行移液性測(cè)試。

圖1 表明當使用反向移液技術時,移液量的變(biàn)化比使用正向移液技術處於(yú)更狹窄的一個範圍。

圖2 表明使用兩種移液方式的不度。不度是估量移液的重複性的。反向移液技術可以使不度相對(duì)於(yú)正向移液技術降低50%。

    這是因爲,BSA溶液含有易被疏水移液器吸頭壁吸附的疏水成分。當使用正向移液技術時,每次移液後少量的液體易殘(cán)留在吸頭中。這種趨勢會增加吹出液體體積之間的偏差,因爲當重複移液時吸頭中累積的殘(cán)餘液體可能增加下一次移液的移液量。而反向移液技術中有額外的液體被吸入吸頭中,這些額外的液體作用似一個蓄水池它使連續移液的移液量均等。這個蓄水池也能阻止空氣在吹出液體的zui後從(cóng)吸頭口進入,這樣可以降低液體起泡的可能性。這使反向移液技術在移取小液量液體時尤其有用。由此可見,選擇Thermo Scientific F2移液器,同時配合反向移液技術,可較好的提高移取蛋白溶液的度和重複性。

來源 :離心機

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