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更新時間:2017-08-10
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利用 3 種質量濃度的聚蔗糖泛影葡胺分離液分離臍血單(dān)個核細胞,用細胞計數法、活細胞染色法及流式細胞計數儀分析單(dān)個核細胞的表面标志,以探讨密度梯度離心法分離人臍血幹細胞分離介質的*濃度,建立臨床級幹細胞分離應用方案,使用的離心機設備(bèi)爲冷凍離心機
臍血由於(yú)其來源容易,所含細胞種類和數量比較多,比骨髓和外周血中的細胞更爲原始,且其臨床應用不涉及社會、倫理、法律方面的限制等優勢。臍血間充質幹(gàn)細胞可以分化爲成骨、軟骨、脂肪細胞等,内皮幹(gàn)/祖細胞治療缺血性疾病,已經在臨床有突出的療效。
國内、外分離臍血幹細胞方法常採(cǎi)用磁珠/流式細胞分選法、臍血庫儀器/羟乙基澱粉沉澱法和密度梯度離心法。由於(yú)目的不同,各類方法有其自身特點
臍血庫分離幹細胞常用羟乙基澱粉沉澱和儀器離心分離法,分離的細胞量大、成分較多但混有大量紅細胞,适合用作大量分離、儲存幹細胞。密度梯度離心法多採(cǎi)用Percoll、Ficoll分離液分離細胞,得到單個核細胞群,該細胞群成分複雜,純度不高。但密度梯度離心法分離臍血單個核細胞由於(yú)細胞得率高、方法簡單等突出優點,有望成爲制備臨床級幹細胞的優選方法,分離介質以聚蔗糖泛影葡胺zui爲常用。
應用臍血離心分離幹細胞的目的是獲得以幹細胞(間充質幹細胞、造血幹細胞)爲主要群體的單個核細胞群。用聚蔗糖泛影葡胺爲分離介質研究何種密度狀态下獲得的幹細胞zui多,目前尚未深入研究。文章在前期工作基礎(chǔ)上,探索密度梯度離心法用3種不同質量濃度分離液分離臍血單個核細胞,比較分離單個核細胞不同亞群的比例和純(chún)度,試圖找出用密度梯度離心法獲得幹細胞比例和純(chún)度較高的分離介質。